Среди вирусных болезней сельскохозяй­ственных животных, характеризующихся зло­качественным ростом, лейкоз по частоте и тяжести процесса занимает одно из ведущих мест. Заболевание широко распространено в большинстве субъектов Российской Федера­ции. Оно наносит значительный экономиче­ский ущерб, связанный со снижением молочной продуктивности, преждевременной выбраковкой высокопродуктивных животных,  недополучением молодняка, а также нарушением племенной работы. Широкому распространению лейкоза крупного рогатого скота способствуют отсутствие на местах систематической работы по организации и проведению оздоровительных мероприятий,   передержка в стадах больных и инфицированных животных, нарушение цикла изолированного выращивания молодняка.

Заболевание носит необратимый характер, протекает вначале бессимптомно, затем акти­вируется пролиферация лимфоидных клеток кроветворной ткани с нарушением их диффе­ренциации и образованием опухолей в крове­творных и других органах и тканях. Особен­ность развития патологического процесса при этом - резкое преобладание пролиферативных процессов над таковыми нормальной дифференцировки клеток крови и метапластическим разрастанием разных патологических элементов, развивающихся из исходных кле­ток ретикулярной стромы с их превращением в клетки, составляющие морфологическую сущ­ность того или иного типа лейкоза.

Социальная опасность обусловлена тем, что вирус лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) и вирус Т-клеточного лейкоза челове­ка входят в один и тот же род по существующей классификации. Хотя к настоящему времени случаев инфицирования человека ВЛКРС не выявлено, вероятность рекомбинации между этими возбудителями, которая может приве­сти к появлению новой онкогенной сущности опасной для человека, не исключена.

До настоящего времени остаются слабо изученными процессы возникновения, течения и распространения лейкозов. В этой связи особое значение приобретает выяснение роли кровососущих насекомых и клещей в сохране­нии и передаче вируса лейкоза восприимчи­вым животным, что необходимо учитывать при разработке программ оздоровительных меро­приятий. Некоторые авторы высказывали мне­ние о возможности передачи ВЛКРС слепня­ми, мухами-жигалками, но вопрос в отношении иксодовых клещей и комаров остается откры­тым.

Цель наших исследований - изучить в экс­периментальных условиях роль иксодовых кле­щей в передаче вируса лейкоза крупного рога­того скота.

Для этого необходимо разработать метод культивирования наиболее распространенно­го вида иксодид Dermacentor reticulates в лабо­раторных условиях и установить восприимчи­вость клещей D. reticulatus к ВЛКРС.

Проанализировав данные по инфицирован­ности ВЛКРС и заболеваемости крупного рога­того скота лейкозом в Тюменской области за 1987 - 2007 гг., установили рост данных пока­зателей к 1995 г. с последующей положитель­ной динамикой их снижения. В этот же Кормили клещей на взрослых лаборатор­ных животных (кролики). Для предотвращения скусывания подсаженных особей на различных фазах развития на шею кролика надевали кру­глый "воротник", а на выбритую часть спины прикрепляли "колпачок" для создания изоли­рованной от остальной части тела камеры кормления. У кролика позади лопаток на спине выстригали шерсть, на освобожден­ный участок наклеивали "колпачок", внутрь которого помещали половозрелых клещей обоего пола не более 20 экземпляров. Для этого голодных личинок и нимф быстро выни­мали группами из пробирки влажной кисточ­кой и помещали в колпачок. Сытых клещей переносили в пробирки с опилками. Во всех пробирках было по одной сытой самке или 50 нимф, 200 - 300 сытых личинок.

Изучая восприимчивость клещей D. reticulatus к ВЛКРС, сформировали две группы коров, которых предварительно исследовали гематологическим методом и в РИД на нали­чие антител к вирусу лейкоза. Опытная группа (n=6) состояла из гематологически больных животных, а контрольная (n=6) - из отрица­тельно реагирующих. Иксодид (лабораторные линии голодных имаго) подсаживали на коров обеих групп в летний период (июнь - июль) 2005 - 2008 гг. Для этого мешочки из плотной ткани с 20 экз. клещей подвязывали на ушную раковину животных и ежедневно наблюдали за их питанием. Насытившихся иксодид снимали с животных, маркировали и доставляли в Уральский НИВИ для вирусологи­ческого исследования с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). Пробоподготовка заключалась в растирании клещей до гомоген­ного состояния пестиком в фарфоровой ступ­ке, а затем приготовлении 10%-ной суспензии их в стерильном физиологическом растворе. ДНК из исследуемого материала выделяли, применяя комплект реагентов "ДНК-сорб-В" (Центральный НИИ эпидемиологии). При этом после обработки лизирующим раствором про­исходит разрушение комплекса ДНК-белок, нуклеиновая кислота осаждается на сорбенте с последующим переходом её в элюирующий буфер.

Для индикации ДНК провируса лейкоза использовали тест-систему "Лейкоз КРС-про-вирус" (Центральный НИИ эпидемиологии), а для ее амплификации - амплификатор 2720 thermal cycler. Электрофоретическую детекцию продуктов амплификации в агарозном геле проводили, применяя комплект реагентов "ЭФ" вариант 200 (Временное наставление по применению тест-системы "лейкоз крупного рогатого скота - провирус" для диагностики лейкоза крупного рогатого скота методом полимеразной цепной реакции, Департамент ветеринарии МСХ РФ). Продукты ПЦР поме­щали в лунки агарозного геля и подвергали действию постоянного электрического тока. В состав геля входит бромид этидия, который, образуя устойчивый комплекс с ДНК, делает эти полосы хорошо заметными при просмотре под ультрафиолетовым излучением.

Лабораторно-диагностические исследова­ния (РИД, ИФА, ПЦР и гематологические исследования) выполняли согласно существу­ющим методическим указаниям по диагности­ке лейкоза крупного рогатого скота (2000).

Результаты исследований. При наблю­дении за процессом развития клещей устано­вили, что самое длительное время – 14-25 сут или 33,1% от всего периода метаморфоза генерации (срок созревания и появления стадии) занимает процесс развития личинок. Процесс питания имаго и нимф происходит 9-12 и 5-10 сут или 17,8 и 12,7 % соответственно. Следовательно, треть своего жизненного цикла D. reticulatus во всех фазах развития проводит на животном, что, несомненно, может служить причиной инфицирования их вирусом лейкоза.

Клещи к кожным покровам животных при­сасываются в течение 1-2 сут, сосание крови продолжается 9-12 дней. Сытые самки через 4-7 дней после нахождения в термостате начинали откладывать яйца, а спустя 11-13 сут регистрировали выход личинок, который продолжался 5 - 15 (в среднем 10,4+4,8) дней и составлял 86 - 99 %.

В дальнейших опытах личинок паразита, полученных из яиц в термостате, подсаживали на кроликов. Процесс питания их продолжался 2-3 дня, после чего личинок собирали с тела хозяина и помещали в термостат (при выше­указанных температуре и влажности). Спустя 5-8 сут они повторно линяли и за 2 - 3 (в среднем 2,7±0,63) дня доходили до стадии нимфы. Выход нимф из личинок составлял 82 -87 %. Наиболее жизнеспособных особей отби­рали и аналогично личинкам вновь помещали на кроликов. Насыщение их длилось 5-10 (7,7±2,4) сут, после чего нимф помещали в тер­мостат с вышеуказанными условиями. Через 5-7 дней у них начиналась линька, а спустя 1 - 3 сут 74 - 79 % таких нимф превращалось в имаго. В опытах наблюдали гибель паразита на разных стадиях развития D. reticulatus, наи­больший отход его регистрировали при разви­тии из нимфы в имаго (21 - 26 %, в среднем -23,8±2,4 %), а наименьший - при метаморфозе яиц в личинки (1 - 14 %, в среднем - 7,6±6,4 %). Гибель клещей на всех фазах метаморфоза колебалась от 40 до 78 % (60,5±4,7 %).

Результаты показали, что полный метамор­фоз клеща D. reticulatus в лабораторных усло­виях длился 44 - 74 (59±3,95) сут. Таким обра­зом, при создании оптимальных условий микроклимата (температура 27 °С и влажность воздуха 55 - 60 %) D. reticulatus можно культивировать на протяжении всего календарного года, получив при этом 4-8 генераций, то есть необходимое количество материала для про­ведения исследовательских работ, хотя гибель его в этот период составляет 60,5±4,7 %.

Изучая возможность сохранности ВЛКРС в напитавшихся самках иксодид, а также трансовариальной и трансфазовой передачи воз­будителя, ДНК вируса лейкоза крупного рога­того скота в теле иксодид, снятых с контроль­ных коров, не выявляли на протяжении всего опыта. При постановке ПЦР с пробами из иксодид, снятых с животных опытной группы, в 87,7±2,3 % случаев подтвердили наличие ДНК ВЛКРС, что свидетельствует о возможно­сти резервирования вируса в теле иксодовых клещей.

Заключение. Подтверждена возможность трансмиссивного пути передачи ВЛКРС. Поэ­тому необходимо уделять больше внимания защите крупного рогатого скота от кровососу­щих паразитов в помещениях и на пастбище. Следует продолжить исследования по изуче­нию вопросов передачи вируса лейкоза крово­сосущими паразитами по таким направлениям как: выделение живой культуры ВЛКРС из кле­щей, паразитирующих на инфицированных животных, для определения времени пребыва­ния жизнеспособного возбудителя в организ­ме кровососущего паразита; опытным путем установить вероятность заражения восприим­чивых животных кровью, находящейся в клеще; типировать вирус, циркулирующий в инфици­рованном дойном стаде крупного рогатого скота Тюменской области.

период было выделено 3,2 - 3,5 % больных лейкозом животных (наибольшее число), затем их количество постепенно уменьшилось до 1,8 - 1,2 %. Данные показатели отражают эффективность внедряемой в области "Комплексной програм­мы оздоровительных противолейкозных меро­приятий".

Материалы и методы. В силу доминиро­вания на территории Тюменской области Dermacentor reticulates его и выбрали в качестве исследуемого вида. Собранных с животных и растений клещей использовали для выведения культуры. Их помещали в химические пробир­ки, плотно закрывали ватно-марлевой пробкой и хранили в холодильнике при 4 °С, а также при комнатной температуре (18 - 20 °С). В одном садке находилось до 50 взрослых голодных клещей.